Продукты пищевые. Определение охратоксина А в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрического детектирования.

Система для ВЭЖХ в указанной ниже комплектации.

• Инжектор, обеспечивающий объем ввода 50 мм³.
• Резервуары для подвижной фазы и реактива для послеколоночной дериватизации.
• Насос для подачи подвижной фазы, пригодный для работы в градиентном режиме, обеспечивающий скорость потока 1 см³/мин.
• Детектор флуоориметрический, позволяющий проводить измерения при длинах волн возбуждения и эмиссии соответственно 390 и 440 нм.
• Самописец, интегратор или компьютерная система обработки данных.
• Колонка для ВЭЖХ аналитическая, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,7 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом, например, с привитыми октадецильными группами (ODS), диаметром частиц 5 мкм, обеспечивающая отделение пика охратоксина A от сопутствующих пиков матрицы пробы. Перекрывание пика охратоксина A другими пиками не должно превышать 10% его высоты. Для предотвращения потери работоспособности аналитической колонки следует использовать защитную колонку, заполненную подходящим обращенно-фазовым сорбентом.
• Дегазатор (применяется по выбору пользователя) для дегазации подвижных фаз и реактива для послеколоночной дериватизации.
• Термостат колонок, обеспечивающий рабочую температуру (50±1)°С.
• Система для послеколоночной дериватизации, состоящая из безпульсационного насоса, соединительного элемента для трех капилляров, имеющего нулевой мертвый объем, и реактора в виде капилляра из нержавеющей стали длиной 10 см и внутренним диаметром 0,25 мм.

Спектрофотометр, пригодный для измерений оптической плотности в ультрафиолетовой области спектра, в комплекте с кварцевыми кюветами.

Блендер высокоскоростной.

Весы аналитические, пригодные для взвешивания с точностью до 0,0001 г.

Весы лабораторные, пригодные для взвешивания с точностью до 0,1 г.

Устройство для вакуумной фильтрации многопозиционное, приспособленное для установки иммуноаффинных колонок (манифолд).

Бумага фильтровальная, пригодная для качественного анализа.

Бумага индикаторная для определения рН в диапазоне от 0 до 14.

Центрифуга лабораторная рефрижераторная, обеспечивающая центробежное ускорение 15300 g и рабочую температуру 4°С.

Стаканы центрифужные вместимостью 250 см³, снабженные винтовыми крышками, химически устойчивые к воздействию метил-третбутилового эфира и обеспечивающие отсутствие деформаций при центробежном ускорении 15300 g.

Испаритель ротационный, снабженный водяной баней.

Корпусы от одноразовых медицинских шприцев для использования в качестве резервуаров вместимостью 5, 20 и 50 см³, запорные краны и приспособления для подсоединения иммуноаффинных колонок.

Микрошприцы вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 мм³.

Колбы мерные вместимостью 10, 50 и 1000 см³.

Насос вакуумный.

Колбы круглодонные вместимостью 100 см³.

Пипетки градуированные.

Пипетки автоматические вместимостью 100 и 1000 мм³, снабженные подходящими наконечниками.

Сосуды стеклянные, аналогичные сосудам для автосамплера газового хроматографа вместимостью около 1,8 см³, снабженные обжимными крышками.

Воронка делительная вместимостью 250 см³.

Устройство перемешивающее (миксер) типа Вортекс.

Гелий газообразный очищенный сжатый.

Азот.

Натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный (Na₂HPO₄) или гидратированный (Na₂HPO₄·12H₂O).

Калий хлористый.

Калий фосфорнокислый однозамещенный.

Натрий хлористый.

Натрия гидроксид.

Аммония гидроксид, водный раствор массовой долей w (NH₄OH)=25% (реактив для послеколоночной дериватизации).

Кислота соляная, раствор массовой долей w (HCl)=37% (по результатам ацидиметрического анализа).

Кислота фосфорная, раствор массовой долей w (H₃PO₄)=85%.

Кислота соляная, раствор молярной концентрации c(HCl)=0,1 моль/дм³

Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c(NaOH)=0,1 моль/дм³

Раствор фосфатно-хлоридный буферный молярной концентрации хлористого натрия c(NaCl)=120 ммоль/дм³, хлористого калия c(KCl)=2,7 ммоль/дм³, фосфатного буфера c(Na₂HPO₄+KH₂PO₄)=10 ммоль/дм³, рН 7,4

Смешанный раствор фосфорной кислоты концентрации 0,5 моль/дм³ и хлористого натрия молярной концентрации 2 моль/дм³.

Кислота уксусная ледяная массовой долей w (CH₃COOH)≥99,7%.

Кислота уксусная, раствор объемной долей 9%. Смешивают 90 см³ уксусной кислоты по 4.16 и 910 см³ воды.

Гексан.

Метанол для градиентной ВЭЖХ.

Толуол.

Смесь метанола и раствора уксусной кислоты 72:18 по объёму .

Метил-третбутиловый эфир.

Смесь толуола и ледяной уксусной кислоты в объемном соотношении 99:1.

Подвижная фаза А для ВЭЖХ.  Раствор уксусной кислоты объемной долей 9%.

Подвижная фаза В для ВЭЖХ.  Метанол.
Подвижные фазы дегазируют, например с использованием гелия. Гелий барботируют через подвижные фазы в резервуарах со скоростью от 50 до 100 см³/мин. В качестве альтернативы возможно также использование вакуумного дегазатора.

Колонка с иммуноаффинным сорбентом. 
Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом, содержащим иммобилизованные антитела, специфичные в отношении охратоксина A, имеющая сорбционную емкость по охратоксину А не менее 100 нг и обеспечивающая полноту обнаружения не менее 85% при внесении в нее 3 нг охратоксина А в растворе, состоящем из 15 объемных частей метанола и 85 объемных частей фосфатно-хлоридного буферного раствора.

Охратоксин А кристаллический или в виде ампульного препарата в пленочной форме.