Продукты пищевые функциональные. Метод определения витамина А.
ГОСТ Р 54635-2011
Настоящий стандарт распространяется на функциональные пищевые продукты и устанавливает метод определения массовой доли витамина А в виде ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).
Содержание витамина А определяется как массовая доля ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола, выраженная в миллионных долях (млн-1).
Диапазон измерений массовой доли витамина А составляет от 0,5 до 10,0 млн-1.
Настоящий стандарт допускается распространять на пищевые продукты при условии соблюдения диапазона измерений.
Определение витамина А в экстракте, полученном из анализируемой пробы, проводят разделением методом ВЭЖХ с последующим фотометрическим или флуориметрическим детектированием. При необходимости экстракт получают после щелочного гидролиза анализируемой пробы.
Количественный анализ проводят методом внешнего стандарта с использованием площади или высоты пиков ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола.
Для определения содержания массовой доли витамина А применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы:
- весы по ГОСТ Р 53228, обеспечивающие точность взвешивания с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,1 мг;
- спектрофотометр со спектральным диапазоном работы от 190 до 1100 нм, основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%;
- кюветы кварцевые с длиной оптического пути 1 см;
- хроматограф высокоэффективный жидкостный, включающий следующие элементы: насос; устройство для ввода проб; флуориметрический детектор (длины волн, нм: возбуждения - 325 нм, эмиссии - 470 нм) или спектрофотометрический детектор (длина волны детектирования - 325 нм) с уровнем шумов не более 10-4 единиц оптической плотности и относительной погрешностью измерений не более 10%; колонку аналитическую для ВЭЖХ диаметром 0,30-0,46 см, длиной 10-25 см, заполненную октадецилсиликагелем с размером частиц 5 мкм; регистрирующее устройство - интегратор или самописец, позволяющий проводить измерение площади (или высоты) пика с погрешностью не более 1%; программное обеспечение для обработки полученных результатов измерений;
- фильтры для фильтрования подвижной фазы и анализируемых растворов (например, с размером пор 0,45 мкм);
- микрошприц типа "Гамильтон" вместимостью 0,1 см3 для ввода проб в жидкостный хроматограф;
- пипетки градуированные 1(2,3)-1(2)-1-0,5(1,2,5,10,25) по ГОСТ 29227 или дозаторы автоматические с аналогичными или изменяемыми объемами доз с относительной погрешностью дозирования не более ±1%;
- цилиндры 1-50(100,250)-1(2) по ГОСТ 1770;
- колбы мерные 2-50(100,250,500,1000)-2 по ГОСТ 1770;
- пробирки мерные с притертыми пробками П-2-5(10,15,20,25)-0,1(0,2)ХС по ГОСТ 1770;
- стаканы В(Н)-1-50(100,150,250)ТХС по ГОСТ 25336;
- колбы круглодонные К-1-100(250,500)-29/32ТС по ГОСТ 25336;
- воронки В-36(56)-80ХС, В-75-110(140)ХС, В-100-150ХС по ГОСТ 25336;
- линейка металлическая с ценой деления 1 мм по ГОСТ 427;
- встряхиватель для колб и пробирок с диапазоном частот колебаний платформ 100-150 колебаний в минуту;
- центрифуга, обеспечивающая 4-6 тыс. об/мин;
- баня водяная с регулятором нагрева, поддерживающая температуру от 40°С до 100°С;
- баня ультразвуковая лабораторная рабочим объемом не менее 2 дм3;
- испаритель ротационный с диапазоном рабочего давления от 7 мм рт.ст. до 760 мм рт.ст. (от 9·102 Па до 10·104 Па) или насос водоструйный по ГОСТ 25336;
- холодильники стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336;
- термометр лабораторный жидкостный диапазоном температур от 0°С до 100°С, ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498;
- баллон с газообразным азотом по ГОСТ 9293, ос.ч.;
- бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026;
- плитка электрическая закрытого типа по ГОСТ 14919;
- мельница лабораторная электрическая;
- холодильник бытовой по ГОСТ 16317.
При выполнении измерений применяют следующие реактивы и материалы:
- спирт этиловый абсолютный (C2H5OH) массовой долей основного вещества не менее 99,9%;
- спирт этиловый ректификованный (C2H5OH) массовой долей основного вещества не менее 96% или по ГОСТ Р 51652, ГОСТ 18300;
- метиловый спирт (CH3OH), массовой долей основного вещества не менее 99,9%;
- ацетонитрил (CH3CN), массовой долей основного вещества не менее 99,8%;
- метилен хлористый (CH2Cl2), массовой долей основного вещества не менее 99,8%;
- н-гексан (C6H14), массовой долей основного вещества не менее 99%;
- 2-пропанол (C3H8O), массовой долей основного вещества не менее 99%;
- эфир петролейный, перегнанный при температуре (50±10)°С, очищенный от перекисей;
- эфир диэтиловый, очищенный от перекисей, содержащий 0,1% пирогаллола;
- калия гидроокись (КОН) по ГОСТ 24363, х.ч. или ч.д.а., раствор КОН массовой долей 50%;
- натрий сернокислый (Na2SO4) безводный массовой долей основного вещества не менее 99,5% или по ГОСТ 4166, х.ч.;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
- кислоту аскорбиновую (C6H8O6), х.ч.;
- гидрохинон (C6H6O2), массовой долей основного вещества не менее 99% или по ГОСТ 19627;
- пирогаллол (C6H6O3), массовой долей основного вещества не менее 99%;
- бутилгидрокситолуол (C15H24O) массовой долей основного вещества не менее 99%;
- ретинол M(C20H30O)=286,5 г/моль, массовой долей основного вещества не менее 90%;
- ретинола ацетат M(C22H32O2)=328,5 г/моль, массовой долей основного вещества не менее 90%;
- ретинола пальмитат M(C36H60O2)=524,9 г/моль, массовой долей основного вещества не менее 90%.
