Продукция пищевая. Определение витамина В с индексом 6 (включая гликозилированные формы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ EN 14663-2014
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина B6 в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Витамин B6 определяется как сумма пиридоксина, пиридоксаля, пиридоксамина, включая их фосфорилированные производные, а также β-гликозилированные формы, в пересчете на пиридоксин.
Производные витамина B6 (пиридоксаль, пиридоксамин и пиридоксин) извлекают из пищевой продукции путем кислотного гидролиза, затем подвергают ферментативному воздействию: дефосфорилируют, используя кислую фосфатазу, и дегликозилируют, используя β-глюкозидазу.
Полученные производные витамина B6 разделяют и количественно определяют методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием
УФ-спектрофотометр, пригодный для измерения оптической плотности при определенных длинах волн.
Нагревательные приборы. Используют лабораторный автоклав и печь или водяную баню, оборудованные мешалками и позволяющие устанавливать температуру на уровне 37°С.
Система для ВЭЖХ. Система для ВЭЖХ состоит из насоса, устройства для ввода проб, флуоресцентного детектора, обеспечивающего длину волны возбуждения 290 нм и длину волны регистрации 390 нм, интегратора или устройства для обработки данных, устройства для постколоночной дериватизации.
Колонки для ВЭЖХ. Используют обращенно-фазовую колонку со следующими характеристиками: Luna RP С18, 5 мкм, размер частицы 5 мкм, диаметр 4,0 мм, длина 250 мм.
Устройства фильтровальные. Фильтрация подвижной фазы, а также раствора анализируемой пробы через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм перед использованием или вводом проб увеличит срок службы колонок.
Фосфат калия двузамещенный, массовая доля w(K2HPO4·3H2O)≥99,9%.
Ацетат натрия безводный, w(CH3COONa)≥99,0%.
Трихлоруксусная кислота (ТХУ), w(СCl3COOH)≥99,0%.
Раствор ацетата натрия молярной концентрацией c(CH3COONa) = 2,5 моль/дм3
Реагент послеколоночный (дополнительно), K2HPO4 раствор с концентрацией c(K2HPO4) = 0,15 моль/дм3.
Соляная кислота, c(HCI) = 1 моль/дм3.
Соляная кислота, c(HCI) = 0,1 моль/дм3.
Соляная кислота, c(HCI) = 0,2 моль/дм3.
Серная кислота, c(H2SO4) = 1 моль/дм3.
Эфир петролейный, диапазон кипения от 40°С до 60°С.
Фосфатаза кислая из картофеля. Ферментативная активность составляет около 5,3 U/мг.
β-Глюкозидаза из миндаля с ферментативной активностью приблизительно 3,2 U/мг.
Подвижная фаза для ВЭЖХ (серная кислота, c(H2SO4) = 0,015 моль/дм3, содержащая 0,005 моль/дм3 трихлоруксусной кислоты)
Силиконовое масло для удаления пены.
Пиридоксамина (РМ) дигидрохлорид, w (C8H12N2O2·2HCl)≥98%.
Пиридоксаля (PL) гидрохлорид, w (C8H9NO3·HCl)≥98%.
Пиридоксина (PN) гидрохлорид, w (C8H11NO3·HCl)≥98%.
