Продукция пищевая. Определение витамина K с индексом 1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ EN 14148-2015
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина K1 в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Определение витамина K1 проводится путем измерения восстановленного филлохинона.
Витамин K1 отделяют в растворе пробы от сопутствующих веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и определяют флуориметрическим методом после восстановления в послеколоночном реакторе. Количественно определяют сумму изомеров витамина K1, которые на колонках с фазой C18 выходят в виде единого неразрешенного пика.
УФ-спектрофотометр, способный измерять оптическую плотность при установленной длине волны, в кюветах с оптической длиной пути 1 см.
Система для ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства для инжекции проб, флуориметрического детектора, позволяющего выполнять измерения при заданных длинах волн (например, при длине волны возбуждения 243 нм и длине регистрации 430 нм), и системы для сбора и обработки данных (например, интегратора).
Аналитическая колонка с обращенной фазой, диаметром 3,0-4,6 мм, длиной 100-250 мм, заполненная частицами размером 3-10 мкм.
Допускается использовать колонки других размеров или с частицами другого размера. В этом случае параметры разделения должны быть адаптированы к таким материалам, чтобы обеспечить аналогичные результаты.
Система послеколоночной дериватизации. Колонка из нержавеющей стали или стекла, помещенная между аналитической колонкой и флуориметрическим детектором, диаметром 2,0-6,0 мм, длиной 10-150 мм, заполненная цинковым порошком.
Устройство для фильтрации. Подходит мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Метанол, массовая доля w(CH3OH)≥99,8%.
Этанол, объемная доля φ(C2H5OH)≥99,8%.
Смесь этанола и метанола, объемная доля φ(C2H5OH)=95%
Дихлорметан, массовая доля w(CH2Cl2)≥99,5%.
н-Гексан, массовая доля w(C6H14)≥97%.
Петролейный эфир, с диапазоном температуры кипения 35-60°С, ч.д.а.
Гидроксид калия, массовая доля w(KOH)≥85%.
Раствор гидроксида калия молярной концентрации c(КОН)=10 моль/дм3.
Калий фосфорнокислый однозамещенный, массовая доля w(KH2PO4)≥99,5%.
Карбонат калия, массовая доля w(K2CO3)≥99,9%.
Ацетат натрия, безводный, массовая доля w(CH3COONa)≥99,5%.
Уксусная кислота, массовая доля w(CH3COOH)≥99,8%.
Хлорид цинка, массовая доля w(ZnCl2)≥98%.
Цинк, порошок, размер частиц <63 мкм, массовая доля w(Zn)≥97%.
Фосфатный буфер с рН 7,9-8,0. Растворяют 54,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного примерно в 350 см3 воды, регулируют рН до 7,9-8,0 раствором гидроксида калия и разбавляют до 500 см3 водой.
Раствор хлорида-ацетата цинка. Взвешивают 13,7 г хлорида цинка, 4,1 г безводного натрия ацетата и 3,0 г уксусной кислоты и переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в метаноле и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом.
Липаза типа VII. Липаза из Candida rugosa с каталитической активностью 1000 Ед/мг или другой подходящий вариант. Могут использоваться другие источники фермента из видов Pseudomonas и Rhizopus с учетом разницы в показателях активности.
Подвижная фаза для ВЭЖХ. Смешивают 100 см3 дихлорметана, 900 см3 метанола и 5 см3 раствора хлорида-ацетата цинка. Фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Витамин K1, образец сравнения (филлохинон, 3-фитилменадион), массовая доля w(C31H46O2)≥99%
