Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина A в продовольственном сырье и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания.
МУК 4.1.2204-07
Метод включает следующие этапы:
- экстракция охратоксина A из пробы смесью ацетонитрил-вода (60:40% об.);
- очистка экстракта на иммуноаффинной колонке;
- определение охратоксина A с помощью ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием при длине волны возбуждения (λвозб) 333 нм и длине волны эмиссии (λэмис) 466 нм.
- Диапазон определяемых концентраций: 0,0001 - 0,016 мг/кг.
Предел количественного определения: 0,0005 мг/кг.
Метрологические характеристики метода, установленные для разных концентраций охратоксина A в пробе
| Метрологические характеристики | Концентрация охратоксина A в пробе, мг/кг | |
|---|---|---|
| 0,0001 - 0,001 | > 0,001 | |
|
Границы относительной погрешности (показатель точности) (±δ), %, при P = 0,95 |
30,72 |
10,92 |
|
Стандартное отклонение повторяемости (σr), % |
24,56 |
8,78 |
|
Предел повторяемости (r), % |
68,77 |
24,58 |
|
Полнота извлечения веществ, % |
88,80 |
86,28 |
Система ВЭЖХ, состоящая из насоса высокого давления, инжектора типа Rheodyne-7125 с объемом петли-дозатора 50 мкл, спектрофлуориметрического детектора, обеспечивающего возбуждение флуоресценции в спектральной области 330 - 340 нм и регистрацию эмиссии флуоресценции при длине волны 466 нм и системы для сбора и обработки данных типа Мультихром (Амперсенд, Россия) или аналогичной, хроматографической колонки (250 x 4,6 мм), заполненной силикагелем, химически связанным с октадецилсиланом с размером частиц 5 мкм (например, Kromasil C18 (MetaChem Texnologies, США).
Весы аналитические.
Микрошприц на 100 мкл для ВЭЖХ.
Дозатор пипеточный, 1 - 5 см3.
Дозатор пипеточный, 100 - 1000 мкл.
Дозатор пипеточный, 10 - 100 мкл.
Цилиндры мерные с притертой пробкой вместимостью 100 см3 тип 2-100 и 2-250 по ГОСТ 1770-74.
Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С или аналогичный по ТУ 64-1-2451.
Ротационный испаритель ИР-1М с ловушкой или аналогичный по ТУ 25-11917.
Электрошкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры +/- 2,5 в интервале от 50 до 350 °C по ТУ 16-531.639.
Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.
Мельница лабораторная электрическая ЭМ-3А или аналогичная по ТУ 46-22-236-79.
Магнитная мешалка типа ММ 5 с перемешивающим стержнем по ТУ 25-11.834-80.
Колбы плоскодонные конические на 250 см3 с НШ 29, тип КнКШ 250-29/32 по ГОСТ 10394-74.
Флаконы стеклянные завинчивающиеся из темного стекла (вайл), объемом 7 см3.
Колбы мерные, вместимостью 100, 500, 1000 см3 тип 2-100-2, 2-500-2 по ГОСТ 1770-74.
Воронки лабораторные по ГОСТ 25336.
Колбы грушевидные на 10 см3 с НШ 14,5, тип ГрКШ-10-14/23 по ГОСТ 10394-72.
Стандарт охратоксина A, фирма "Sigma", кат. N О-1877.
Фильтры обеззоленные "синяя лента" по ТУ 6-09-1678.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный,12-водный, ч.д.а. по ГОСТ 4172-76.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный, 2-водный, ч.д.а. по ГОСТ 245-76.
Натрий хлорид, х.ч. по ГОСТ 4233-77.
Ацетонитрил, ос.ч., сорт 0.
Метанол, ос.ч. по ГОСТ 6995-77.
Кислота фосфорная, ос.ч. по ТУ 2612-014-00203677-97.
Кислота уксусная ледяная, х.ч. по ГОСТ 61-75.
Толуол, ч.д.а. по ГОСТ 5789-78.
Иммуноаффинные колонки Ochraprep (R-Biopharm, Великобритания).
