Молоко и продукты переработки молока. Методика определения содержания антибиотиков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ 33526-2015
Настоящий стандарт распространяется на молоко и продукты переработки молока (молоко (сырое, питьевое), сливки (сырые, питьевые), молочные продукты, молокосодержащие продукты, побочные продукты переработки молока, продукцию детского питания на молочной основе, сыр и сырные продукты, масло из коровьего молока и масляную пасту, консервы молочные, мороженое и смеси для мороженого и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии по определению остаточного содержания антибиотиков: левомицетина (хлорамфеникола), пенициллиновой группы, стрептомицина, тетрациклиновой группы.
Диапазон измерений массовых долей антибиотиков для левомицетина (хлорамфеникола) от 0,0001 млн-1 (мг/кг) до 1,0 млн-1 (мг/кг), для антибиотиков пенициллиновой и тетрациклиновой групп от 0,001 млн-1 (мг/кг) до 1,0 млн-1 (мг/кг), для стрептомицина от 0,005 млн-1 (мг/кг) до 1,0 млн-1 (мг/кг).
Метод основан на экстракции антибиотиков из пробы продукта, очистке экстракта и определении антибиотиков в экстракте методом высокоэффективной жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектированием.
Хроматограф для проведения ВЭЖХ, включающий следующие элементы:
- колонка хроматографическая обращенно-фазная (250х4,6) мм, заполненная силикагелем с диаметром частиц сорбента 3 мкм;
- детектор спектрофотометрический или диодно-матричный с длиной волны детектирования 265 нм и 280 нм с погрешностью задания длины волны ±1 нм;
- петлевое устройство для ввода пробы с рабочим объемом петли 0,020 см3;
- насос высокого давления;
- регистрирующее устройство, позволяющее проводить измерения площади (или высоты) пика с погрешностью ±1%;
- программное обеспечение для статистической обработки полученных результатов измерений.
Устройство вакуумное для твердофазной экстракции.
Картридж для твердофазной экстракции объемом не более 6 см3, заполненный обращенно-фазным сорбентом с диаметром частиц не более 50 мкм.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 или весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, с пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,5 мг и ±1,0 мг.
Анализатор потенциометрический (рН-метр) с диапазоном измерения 1-14 ед. рН, с пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,01 ед. рН.
Центрифуга лабораторная с охлаждением, обеспечивающая скорость вращения не менее 15000 об/мин и диапазон температур охлаждения от 4°С до 20°С, с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3 и микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 см3.
Модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 40°С.
Баня водяная термостатируемая.
Баня ультразвуковая с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3.
Гомогенизатор роторный с четырехлопастным ножом, с угловой скоростью вращения ножей (1000-10000) мин-1, включающий емкость вместимостью 1,0 дм3.
Встряхиватель лабораторный (вортекс) вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой вращения гнезда 3 мм и скоростью вращения гнезда (150-2500) мин-1.
Дозаторы механические переменного объема (0,1-3 мм3, 0,5-10 мм3, 20-200) мм3, 100-1000 мм3, 1-5 см3) с наконечниками.
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки 1-1-1-5, 1-1-1-10 по ГОСТ 29227.
Пробирки мерные стеклянные П-1-10-0,1 ХС по ГОСТ 1770.
Цилиндр 1-25-1, 1-100-1, 1-250-2 по ГОСТ 1770.
Виалы (флаконы полипропиленовые) вместимостью 15 см3 и 50 см3 с герметично закрывающимися пластмассовыми крышками.
Колба Кн-1-250-24/29, Кн-1-500-24/29 ТС по ГОСТ 25336.
Стакан В-1-100, В-1-500, В-1-1000 ТС по ГОСТ 25336.
Воронка В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Фильтр нейлоновый с размером пор 0,45 мкм.
Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д.а.
Ацетонитрил, ч.д.а.
Бензилпенициллин, массовой долей основного вещества не менее 99%.
Демеклоциклин, массовой долей основного вещества не менее 90%.
Доксициклин, массовой долей основного вещества не менее 90%.
Кислота лимонная моногидрат пищевая по ГОСТ 908.
Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч.д.а.
Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х.ч.
Метанол для хроматографии (метиловый спирт), х.ч.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245, ч.д.а.
Окситетрациклина гидрохлорид, массовой долей основного вещества не менее 90%.
Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) по ГОСТ 10652, х.ч.
Стрептомицина сульфат, массовой долей основного вещества не менее 96%.
Тетрациклина гидрохлорид, массовой долей основного вещества не менее 90%.
Хлорамфеникол (левомицетин), массовой долей основного вещества не менее 99%.
Хлортетрациклин гидрохлорид, массовой долей основного вещества не менее 90%.
Феноксиметилпенициллин, массовой долей основного вещества не менее 99%.
Вода для лабораторного анализа деионизированная, с удельным сопротивлением 28 Ом, степень чистоты 2 по ISO 3696.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
