Молоко и молочная продукция. Определения массовой доли витамина D методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ 32916-2014
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочную продукцию и устанавливает определение массовой доли витамина D методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).
Содержание витамина D определяется как массовая доля холекальциферола (витамина D3), выраженная в миллионных долях (млн-1).
Диапазон измерений - от 0,01 до 1,0 млн-1.
Сущность метода заключается в омылении пробы продукта водно-спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витаминов D гексаном. Полученный экстракт исследуют с использованием аналитической обращенно-фазной (далее - ОФ) ВЭЖХ. Витамин D детектируют по поглощению в ультрафиолетовой области спектра, пики идентифицируют по их времени удерживания и спектру.
Количественный анализ проводят с помощью метода абсолютной градуировки.
Хроматограф жидкостный для проведения ВЭЖХ, включающий следующие элементы:
- колонку для проведения анализа методом аналитической ОФ ВЭЖХ диаметром 0,40-0,46 см, длиной 25-30 см, заполненную октадецилсиликагелем, размером частиц 5 мкм;
- детектор спектрофотометрический или диодно-матричный с длиной волны детектирования 265 и 280 нм с точностью задания длины волны ±1 нм;
- устройство для ввода пробы;
- насос;
- регистрирующее устройство (самописец или интегратор), позволяющее проводить измерения площади (или высоты) пика с погрешностью ±1%;
- программное обеспечение для статистической обработки полученных результатов измерений.
Вакуумная установка для твердофазной экстракции.
Картридж для твердофазной экстракции С18 500 мг/6 мл;
Спектрофотометр со спектральным диапазоном от 190 до 1100 нм, с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 или весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, с пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,001 г.
Часы электронно-механические по ГОСТ 27752.
Термометр лабораторный жидкостный диапазоном измерения температур от 0°С до 100°С, ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.
Баня водяная термостатируемая.
Кюветы кварцевые длиной оптического пути 10 мм.
Фильтры мембранные с размером диаметра пор не более 0,5 мкм.
Микрошприц для ВЭЖХ вместимостью 0,100 см3.
Колбы мерные 2-100-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки 1(2,3)-1(2)-1-1(5,10,25) по ГОСТ 29227.
Пробирки мерные с притертыми пробками П-2-5-0,1; П-2-10-0,2; П-2-20-0,2 ХС по ГОСТ 1770.
Цилиндры 1-25-2 по ГОСТ 1770.
Колбы К-1-100-29/32, К-1-250-29/32, К-1-500-29/32 ТС по ГОСТ 25336.
Стаканы В-1-100, В-1-250 ТХС по ГОСТ 25336.
Воронки В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Холодильник ХШ-1-300-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, х.ч., с содержанием основного вещества не менее 99,98%.
Калия гидроокись по ГОСТ 24363, х.ч., раствор молярной концентрации 5 моль/дм3.
Кислота аскорбиновая, фармакопейная.
Спирт изопропиловый абсолютированный массовой долей основного вещества не менее 99,5% по ГОСТ 9805.
Спирт этиловый абсолютированный массовой долей основного вещества не менее 99,9% по нормативным и техническим документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.
Спирт этиловый ректификованный массовой долей основного вещества не менее 96% по ГОСТ 18300.
Холекальциферол (витамин D3) массовой долей основного вещества не менее 98%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
