Зерно и продукты его переработки, комбикорма. Определение охратоксина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Метод A

Хроматограф жидкостный с флуориметрическим или спектрофлуориметрическим детектором, обеспечивающим возбуждение флуоресценции в спектральной области (330±20) нм и регистрацию интенсивности флуоресценции в спектральной области (465±20) нм. Применяемый детектор должен обеспечивать предел обнаружения охратоксина A не более 5 нг/см³.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1-2011 с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 г.

Колонка хроматографическая аналитическая, заполненная обращенно-фазовым сорбентом зернением 5 мкм, имеющая эффективность не менее 5000 теоретических тарелок по пику охратоксина A. Пример коммерческого продукта, удовлетворяющего указанным требованиям - хроматографическая колонка внутренним диаметром 2,1 мм и длиной 120 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом Кромасил С-18 с размером частиц 5 мкм, снабженная предколонкой длиной 25 мм.

Предколонка того же внутреннего диаметра и заполненная тем же обращенно-фазовым сорбентом, что и аналитическая колонка.

Колонка хроматографическая стеклянная с пришлифованной пробкой длиной 200 мм и внутренним диаметром 10 мм.

Измельчитель проб, обеспечивающий измельчение до частиц размером менее 1 мм, например лабораторная мельница.

Испаритель ротационный типа ИР-1М2 или аналогичный, снабженный водяной баней с регулятором температуры в диапазоне от 20°С до 50°С.

Устройство для перемешивания проб (шейкер), обеспечивающее частоту встряхивания до 120 мин^-1.

Насос лабораторный вакуумный, мембранный или водоструйный по ГОСТ 25336, обеспечивающий разрежение от 2,5 до 10 кПа.

Шкаф сушильный, обеспечивающий температуру до 200°С.

Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

Стандартный образец состава раствора охратоксина A в ацетонитриле массовой концентрации 50 мкг/см³ с допускаемой погрешностью ±2,5 мкг/см³.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа степени чистоты 1 по ГОСТ ISO 3696.

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, безводный.

Кислота уксусная по ГОСТ 61, ледяная.

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, оптическая плотность относительно дистиллированной воды при 200 нм не более 0,025, массовая доля воды не более 0,03%.

Гексан для жидкостной хроматографии, ос.ч.

Хлороформ по ГОСТ 20015, очищенный.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч.

Кислота серная по ГОСТ 4204, ч.д.а.

Азот газообразный по ГОСТ 9293.

Пипетки градуированные типов 1-3 исполнений 1(1а) или 2(2а) 2-го класса точности вместимостью 1, 2, 5 см³ по ГОСТ 29227.

Цилиндры мерные исполнений 1-4 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 250 см³ по ГОСТ 1770.

Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2, 2-500-2 по ГОСТ 1770.

Колбы остродонные О-10-14/23 и О-50-14/23 по ГОСТ 25336.

Колбы плоскодонные типа П-1 или Кн-1 вместимостью 50, 100, 250 см³ по ГОСТ 25336.

Дозаторы пипеточные одноканальные переменного объема от 100 до 1000 мм³ с метрологическими характеристиками по ГОСТ 28311.

Воронки лабораторные типа B по ГОСТ 25336.

Стаканы В-1-50 или Н-1-50 по ГОСТ 25336.

Пробирка для микропроб однократного применения (типа Эппендорф) вместимостью 1,5 см³.

Стеклянные емкости вместимостью 50, 250, 1000 см³ с пришлифованными стеклянными, фторопластовыми или полиэтиленовыми пробками.

Сито с диаметром отверстий 1,0 мм.

Палочки стеклянные.

Часы песочные или таймер.

Фильтры бумажные "красная лента".

Вата медицинская по ГОСТ 5556.

Силикагель для колоночной хроматографии с размером частиц от 100 до 200 мкм.

Метод Б

При проведении испытаний используют средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и посуду из метода А, а также нижеследующее.

Колонка хроматографическая аналитическая, заполненная обращенно-фазовым сорбентом зернением 5 мкм, обеспечивающая разделение пика охратоксина A и остальных пиков до базовой линии со следующими характеристиками: длина 250 мм; внутренний диаметр 4 мм; размер сферических частиц 5 мкм. Например, колонка Lichrospher® 100 RP 18.

Предколонка того же внутреннего диаметра и заполненная тем же обращенно-фазовым сорбентом, что и аналитическая колонка, например, со следующими характеристиками:  длина 40 мм; внутренний диаметр 4 мм; размер сферических частиц 5 мкм.

Спектрофотометр, пригодный для измерений в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм и имеющий спектральную ширину полосы не более 2 нм.

Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см, не поглощающие свет в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм.

Пробирки центрифужные, например вместимостью 250 см³, выполненные из полиэтилена высокого давления с завинчивающейся крышкой.

Центрифуга с охлаждением, желательно рефрижераторная, для центрифужных пробирок (см. 6.3.3), способная к созданию ускорения не менее 3500 g.

Колонка для твердофазной экстракции одноразовая, заполненная силикагелем. Например, пригодны колонки, выполненные из полипропиленовой трубки вместимостью 3 см³, со следующими характеристиками: средняя масса силикагеля - 690 мг; размер пор - 12,5 нм; размер частиц - от 55 до 105 мкм.

Резервуары для растворителей, такие как шприцы вместимостью например 50 см³ с центральным отверстием и пробкой.

Воронка делительная вместимостью 50 см³ по ГОСТ 25336.

Фильтры мембранные для водных растворов, выполненные из политетрафторэтилена, с размером пор 0,45 мкм.

Виалы с обжимной или завинчивающейся крышкой.

Микрошпириц вместимостью 500 мм³.